
|              方法              |                          靈敏度              |                          時間              |                          原理              |                          干擾物質(zhì)              |                          說明              |         
|              凱氏定氮法              |                          靈敏度低,使用于0.2-1.0mg氮,誤差為±2%              |                          費時,8-10小時,但如果采用凱氏定氮儀,縮短時間至4個小時              |                          將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨氣,然后用酸吸收滴定              |                          非蛋白氮(可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離)              |                          用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測定,干擾少,如果采用凱氏定氮儀,就會大大縮短定氮時間              |         
|              雙縮尿法              |                          靈敏度低,1-20mg              |                          中速20-30分鐘              |                          多肽鍵+堿性Cu2+紫色絡(luò)合物              |                          硫酸銨:Tris緩沖液,某些氨基酸              |                          用于快速測定,但不靈敏,不同蛋白質(zhì)顯色相似              |         
|              Folin酚試劑法              |                          靈敏度高,<5微克              |                          慢速40-60分鐘              |                          雙縮尿反應(yīng),磷鉬酸-磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原              |                          硫酸銨,Tris緩沖液,甘氨酸,各種硫醇              |                          耗費時間長;操作要嚴(yán)格計時;顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化              |         
|              紫外吸收法              |                          較為靈敏,50-100微克              |                          快速5-10分鐘              |                          蛋白質(zhì)中的絡(luò)氨酸和色氨酸殘基在280nm處德光吸收              |                          各種嘌呤和各種核苷酸              |                          用于層析柱流出液的檢測,核酸的吸收可以校正              |         
|              考馬斯亮藍(lán)法              |                          靈敏度zui高,1-5微克              |                          快速5-15分鐘              |                          考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時,其λmax由465nm變?yōu)?/span>595nm              |                          強(qiáng)堿性緩沖液,TritonX-100SDS              |                          的方法,干擾物質(zhì)少,顏色穩(wěn)定,顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化              |         
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